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實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的優(yōu)勢

2022-09-30 16:12:29

實(shí)時(shí)熒光定量pcr儀,由熒光定量系統和計算機組成,用來(lái)監測循環(huán)過(guò)程的熒光。與實(shí)時(shí)設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過(guò)開(kāi)發(fā)的實(shí)時(shí)分析軟件以圖表的形式顯示。原始數據被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數的圖表。原始數據收集后可以開(kāi)始分析。實(shí)時(shí)設備的軟件能使收集到的數據進(jìn)行正?;幚韥?lái)彌補背景熒光的差異。正?;罂梢栽O定域值水平,這就是分析熒光數據的水平。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀

優(yōu)勢

樣品到達域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數稱(chēng)為Ct值(限制點(diǎn)的循環(huán)數)。域值應設定在使指數期的擴增效率為大,這樣可以獲得準確,可重復性的數據。如果同時(shí)擴增的還有標有相應濃度的標準品,線(xiàn)性回歸分析將產(chǎn)生一條標準曲線(xiàn),可以用來(lái)計算未知樣品的濃度。

所謂real-time Q-PCR技術(shù),是指在PCR反應體系中加入熒光基因,利用熒光信號累積實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在 real-time 技術(shù)的發(fā)展過(guò)程中,兩個(gè)重要的發(fā)現起著(zhù)關(guān)鍵的作用:(1)在90年代早期,TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現,它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。(2)此后熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應管中能實(shí)時(shí)地監測反應全過(guò)程。這兩個(gè)發(fā)現的結合以及相應的儀器和試劑的商品化發(fā)展導致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用。


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