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實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀:如何解決傳統PCR方法的局限性?

2023-11-22 15:03:05

實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)是一種快速的PCR方法,廣泛應用于生命科學(xué)研究和臨床診斷中。相對于傳統PCR方法,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀具有諸多優(yōu)勢,可以解決傳統PCR方法的很多局限性。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀

首先,實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以提供準確的定量結果。傳統PCR方法只能通過(guò)檢測末端PCR產(chǎn)物進(jìn)行定性分析,無(wú)法準確測量目標DNA或RNA的起始量。而實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以通過(guò)監測PCR反應實(shí)時(shí)產(chǎn)生的熒光信號,實(shí)時(shí)定量目標分子的起始量。這使得實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以用于定量比較不同樣本中目標分子的多少,以及測定樣本中目標分子的數量。

其次,實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有高靈敏度和廣量程。相對于傳統PCR方法,實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以檢測更低濃度的目標分子。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的熒光檢測系統可以實(shí)時(shí)監測PCR反應的信號,并準確測量樣本中目標分子的起始量。同時(shí),實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀可以通過(guò)調整熒光探針的濃度和PCR循環(huán)程序來(lái)擴大PCR的線(xiàn)性動(dòng)態(tài)范圍,從而可以同時(shí)檢測濃度差異較大的目標分子。

第三,實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以減少非特異性擴增的問(wèn)題。傳統PCR反應中,可能會(huì )出現非特異性擴增產(chǎn)物的問(wèn)題,導致結果解讀不準確。而實(shí)時(shí)熒光定量PCR通過(guò)使用熒光探針或SYBR Green等熒光染料可以直接監測擴增的特異性,減少非特異性擴增的可能性。熒光探針可以通過(guò)與靶DNA或RNA的特定序列結合,并產(chǎn)生熒光信號,從而準確測量目標分子的起始量。SYBR Green則可以與PCR反應產(chǎn)物結合并發(fā)光,由于其選擇性結合特定序列的能力,能夠區分特異性擴增和非特異性擴增。

此外,實(shí)時(shí)熒光定量PCR還具有操作簡(jiǎn)便、高通量和高度自動(dòng)化的特點(diǎn)。相對于傳統PCR方法,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需等待PCR反應結束后再進(jìn)行分析,減少了實(shí)驗時(shí)間。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的高通量特點(diǎn)使得可以同時(shí)檢測多個(gè)樣本,提高實(shí)驗效率。同時(shí),實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀配備的軟件可以自動(dòng)分析和解讀熒光信號,減少了人為判斷的主觀(guān)性,提高了實(shí)驗結果的準確性。

在實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的發(fā)展中,也不斷出現更多的創(chuàng )新和改進(jìn)。例如,支持多樣本同時(shí)檢測的高通量PCR技術(shù),能夠提高實(shí)驗效率并節省成本。另外,引入新的核酸分析技術(shù),如數字PCR(dPCR)技術(shù)和環(huán)狀DNA聚合酶擴增(RCA)技術(shù),可以進(jìn)一步提高PCR的靈敏度和準確性,擴大PCR的應用范圍。


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