新聞資訊

新聞中心

當前位置: 首頁(yè) > 新聞中心 > 技術(shù)資訊

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀:PCR反應體系如何優(yōu)化?

2023-12-06 09:46:01

實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)是一種常用于定量測量DNA或RNA分子的技術(shù)。PCR反應體系的優(yōu)化是保證實(shí)時(shí)熒光定量PCR能夠高效、準確地進(jìn)行的關(guān)鍵步驟。下面將詳細介紹PCR反應體系的優(yōu)化方法。

模板DNA或RNA的純度和濃度:模板的純度對PCR擴增的效果有重要影響,可能存在的污染物如蛋白質(zhì)、RNA酶等都會(huì )干擾PCR反應的進(jìn)行。因此,在實(shí)驗前應使用合適的方法提取純凈的DNA或RNA,并用光波長(cháng)法(比如260 nm和280 nm波長(cháng)下的吸光度比值)檢測其純度。此外,還需要用熒光探針或SYBR Green等染料檢測模板濃度,確保其在PCR反應中的濃度范圍。

引物的設計:引物是PCR擴增的關(guān)鍵組成部分,其設計需要根據目標序列的特點(diǎn)進(jìn)行,如長(cháng)度、序列等。引物的設計應盡量避免內部互補和3'末端的串聯(lián)重復序列,以減少非特異性擴增和假陽(yáng)性結果的產(chǎn)生。此外,引物的濃度也需要進(jìn)行優(yōu)化,通常需要在不同濃度條件下進(jìn)行試驗,選擇適宜的濃度。

Mg2+離子濃度:Mg2+在PCR反應中起到結構穩定和酶活性調節的作用。Mg2+濃度對PCR擴增的選擇性和效率有重要影響。通常,需要在PCR反應中添加適宜濃度的Mg2+,過(guò)低的濃度會(huì )導致擴增效率降低,而過(guò)高的濃度會(huì )導致擴增特異性下降。

dNTPs的濃度:dNTPs是PCR反應中基因組擴增所需的四種核苷酸單元,其濃度對PCR反應的效果有重要影響。一般情況下,模板造成的限制性擴增會(huì )需要較高的dNTPs濃度,而非特異性擴增需要減低dNTPs的濃度,以增加特異性。

Taq DNA聚合酶的濃度:Taq聚合酶是PCR反應中常用的酶,它在PCR擴增中起到復制DNA的重要作用。Taq聚合酶的濃度對PCR擴增的效率和特異性有重要影響。濃度過(guò)低會(huì )導致擴增效率低下,濃度過(guò)高則容易產(chǎn)生非特異性產(chǎn)物。因此,需要在一定濃度范圍內進(jìn)行試驗,選擇適宜的濃度。

PCR條件的優(yōu)化:PCR反應的條件包括溫度、時(shí)間和循環(huán)數等。溫度的選擇需要根據引物的Tm(退火溫度)進(jìn)行,通常,退火溫度取引物Tm - 5 °C較為合適。PCR循環(huán)數的設置也需要進(jìn)行優(yōu)化,一般根據目標序列的特點(diǎn)和PCR擴增效率確定。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀


近期瀏覽:

相關(guān)產(chǎn)品

相關(guān)新聞

地點(diǎn):石家莊高新區太行南大街509號國械堂高端醫療器械產(chǎn)業(yè)園A-5棟702室

業(yè)務(wù)熱線(xiàn):186-3213-6937    

總部電話(huà):0311-82970259         

郵箱:sanshibio@126.com

亚洲中文字幕日产乱码高清app,日韩亚洲AV人人夜夜澡人人爽,免费观看黄网站,国产精品欧美久久久久无广告